FBA

Evaluación externa de calidad en la determinación de transaminasas

Introducción:
Con el fin de evaluar el desempeño de los métodos de determinación de actividad enzimática con sueros humanos congelados, el Programa de Química Clínica del PEEC distribuyó viales con valores asignados de transaminasas a participantes que utilizan reactivos comerciales optimizados según IFCC a 37ºC. Los valores de actividad enzimática de Alanina-aminotransferasa (ALT) y Aspartato-aminotransferasa (AST) fueron asignados en LARESBIC (Laboratorio de Referencia y Estandarización en Química Clínica de la Fundación Bioquímica Argentina) utilizando los métodos de referencia
de la IFCC con y sin fosfato de piridoxal a 37ºC. La mayoría de los laboratorios utiliza los procedimientos sin fosfato de piridoxal por lo que no se obtuvieron suficientes resultados con fosfato de piridoxal como para realizar análisis estadístico de los datos.

Materiales y métodos:
Se enviaron a 20 participantes del PEEC que utilizan reactivos comerciales optimizados según IFCC para la determinación de AST y ALT, 2 muestras de sueros humanos congelados (material I y material II) preparadas a partir de sendas mezclas de sueros humanos frescos. El único tratamiento realizado
a las muestras fue la filtración para eliminación de posibles restos de fibrina
o material insoluble. Luego se fraccionó en viales que se mantuvieron a –80ºC hasta el momento del envío. La asignación de valores de referencia (VR) se realizó en LARESBIC mediante los procedimientos de Referencia de la IFCC, a 37 ºC, con y sin fosfato de piridoxal. Para la certificación se emplearon 4 viales del Material I y 4 del Material II, tomados al azar para cada transaminasa, y procesados en 4 días diferentes por cuadruplicado. Este proceso se realizó para los procedimientos IFCC sin fosfato de piridoxal, y se repitió para los procedimientos con fosfato de piridoxal.
Los participantes debían realizar determinaciones por duplicado de cada enzima en ambas muestras durante 5 días seguidos, para lo cual se enviaron 5 viales de cada nivel conservados con hielo seco.

Resultados:
Los resultados generales obtenidos se observan en la siguiente tabla.
Se detallan los resultados para los métodos sin fosfato de piridoxal
en todos los casos.
Para ambas enzimas se representan los datos en gráficos de Youden.
En dichos gráficos, el recuadro rojo marca los límites de Desvío Relativo Aceptable (DRA) de +- 20% del PEEC. Además se muestra la distribución
de los resultados de menor a mayor por enzima y por nivel.
(Ver gráficos)

Si tenemos en cuenta los límites de error sistemático (ES) aceptable y coeficiente de variación analítico (CVa) según la variabilidad biológica, la distribución de datos obtenida es la siguiente, donde se dan los porcentajes de laboratorios dentro de los límites aceptables: (ver tablas)
Los resultados obtenidos para ALT muestran la presencia de errores sistemáticos negativos, hecho que se ve reflejado en el grafico de Youden, donde se observa una gran cantidad de datos en el cuadrante (- -). En los gráficos por analito y material se puede ver que la tendencia a valores bajos es más marcada a niveles bajos de ALT (material I) ), donde el 50.0 % de los resultados entran dentro del rango de +/- 20% de desvío relativo aceptable.
Los resultados de AST muestran la presencia de resultados con errores sistemáticos positivos elevados, hecho que se ve reflejado en el grafico de Youden, donde se observa una gran cantidad de datos en el cuadrante (++). En los gráficos por analito y material se puede ver que la tendencia a valores altos es más marcada a niveles bajos de AST (material I), donde el 59.1 % de los resultados entran dentro del rango de +/- 20% de desvío relativo aceptable.

Conclusiones:
La utilización de sueros congelados en la estandarización elimina gran cantidad de efectos de matriz. Los valores de consenso son una herramienta útil en el caso en que no se disponga de valores asignados por métodos de referencia. La gran dispersión de los resultados de los laboratorios, reflejada por los CV% entre 15.7 y 38.6% es una clara indicación de que contar con materiales de control con valores asignados constituye la herramienta de elección en la estandarización de las determinaciones de actividad enzimática.

Bibliografía:
1- IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37°C. Part 1. The Concept of Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes. Clin Chem Lab Med 2002; 40(6): 631–634
2- IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37°C. Part 4. Reference Procedure for the Measurement ofCatalytic Concentration of Alanine Aminotransferase. Clin Chem Lab Med 2002; 40(7):718–724.
3- IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37°C. Part 4. Reference Procedure for the Measurement ofCatalytic Concentration of Aspartate Aminotransferase. Clin Chem Lab Med 2002;
40(7): 725–733
4- Part 7. Certification of Four Reference Materials for the Determination of Enzymatic Activity of-Glutamyltransferase, Lactate Dehydrogenase, Alanine Aminotransferase
and Creatine Kinaseaccording to IFCC Reference Procedures at 37°C. Clin Chem
Lab Med 2002; 40(7):739–745
5- Experimental Network of Reference Laboratories for the Determination of Target Values for EQA on Enzymes Measurement: an IFCC/EMD/C-AQ project. CCLM, vol 37, pag S107.
6- Fundación Bioquímica Argentina. Programa de Evaluación Externa de Calidad (PEEC). Guía del Usuario. Pag. 11.