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Pruebas para identificar Cryptococcus neoformans

Resumen

Antecedentes: El Cryptococcus neoformans es la causa más común de la meningitis fúngica, con una mortalidad sustancial a pesar del tratamiento adecuado. El cultivo cuantitativo de Cryptococcus en el líquido cefalorraquídeo (LCR) durante la terapia antifúngica es de valor pronóstico y tiene implicancias terapéuticas, pero es lento y no es practicable en muchos países de bajos recursos.

Métodos: Pusimos a prueba dos técnicas rápidas para cuantificar criptococos viables usando mezclas de criptococos cultivadas in vitro, vivos y muertos por calor: (i) la microscopía cuantitativa con tinción de exclusión utilizando colorante azul tripan, y (ii) la citometría de flujo, usando el colorante fluorescente 2' - 7' – Bis - (2 - carboxietil) - 5- (6) carboxifluoresceína, éster de acetoximetilo (BCECF-AM). Los resultados se compararon con los cultivos estándar de criptococos cuantitativos. La microscopía cuantitativa también se realizó en muestras de líquido cefalorraquídeo (LCR).
Resultados: Tanto la microscopía y como la citometría de flujo distinguieron entre criptococos viables y no viables. El recuento de células (en escala logarítmica) por microscopía y por cultivo cuantitativo, mostraron una asociación lineal significativa (p <0,0001) y el análisis de Bland-Altman mostró un alto nivel de acuerdo. Las proporciones de células viables (en escala logit), detectadas por citometría de flujo fueron lineal y significativamente asociadas con las proporciones detectadas por microscopía (p <0,0001) y el análisis de Bland-Altman mostró un alto nivel de acuerdo.
Conclusiones: El examen microscópico directo del Cryptococcus teñido con azul tripan y la evaluación por citometría de flujo del Cryptococcus teñido con BCECF-AM mostraron una buena concordancia con los cultivos cuantitativos. Estas son estrategias prometedoras para la determinación rápida de la viabilidad de criptococos, y deben ser investigados en la práctica clínica.

Bibliografía

En inglés

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En español

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Agudice su ingenio
Actividad Interactiva
Lo invitamos a observar las siguientes imágenes y completar el fragmento que se encuentra debajo con las opciones correspondientes:

Microscopia con azul de tripan de Cryptococcus

El estudio histopatológico (microscopio óptico) del Cryptococcus teñido con azul de tripan a un aumento de 40x distingue fácilmente Cryptococcus viables (transparente, flecha blanca) y muertos (azul oscuro, flecha negro) in Vitro *......... y en muestras de LCR *.........
Los eritrocitos (punta de flecha) se observan también en la muestra de LCR en *......... junto con criptococos viables.*......... son muestras de LCR obtenidos antes y después de ser diluidos con agua, respectivamente, lo que lisa las células de mamíferos. La gran célula nucleada (ver imagen) observada antes de la dilución en *......... es un leucocito.
Muchos criptococos viables permanecen en el LCR después de la lisis de células de mamífero en *......... (flecha blanca). La diferente intensidad de color de fondo es debido al ajuste de la iluminación de la microscopía, el enfoque y el contraste. Ningún ajuste de color se realizó después de la fotografía.
Información complementaria
Evaluación con citometría de flujo de criptococos viables usando BCECF.

Criptococos viables y muertos por calor se mezclaron para producir las siguientes proporciones de células vivas: células muertas (100: 0,50:50, 10:90, 1:99, 0: 100) en una dilución de 1 McFarland y se tiñeron con BCECF. Los diagramas de dispersión muestran mezclas representativas en una dilución de 1 McFarland, con el "gate" que contiene células vivas y muertas.

* Elija la/s letra/s de imagen/es correspondiente/s.

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