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Variabilidad de resultados en las pruebas de carga viral
Factores que contribuyen a la variabilidad de los resultados cuantitativos de PCR viral en muestras de ensayos de aptitud: un análisis multivariado.
J Clin Microbiol. 2012; 50(2):337-45. Hayden RT, Yan X, Wick MT, Rodriguez AB, Xiong X, Ginocchio CC, Mitchell MJ, Caliendo AM; College of American Pathologists Microbiology Resource Committee

Mientras que las pruebas de la carga viral han ganado amplia aceptación, una limitación principal sigue siendo la variabilidad de los resultados, en particular entre diferentes laboratorios. Aunque algunos trabajos han demostrado la importancia del material de control cuantitativo estandarizado para reducir esa variabilidad, se ha hecho poco para explorar otros factores importantes en el proceso de amplificación molecular. Se examinaron los resultados de 185 laboratorios inscriptos en la encuesta de carga viral (VLS) para las pruebas de aptitud (PA) del año 2009 del Colegio Americano de Patólogos (CAP). Esto incluyó 165 laboratorios (89,2 %) para citomegalovirus (CMV); 99 (53,5 %) para el virus de Epstein-Barr (VEB); y 64 (34,6 %) para el virus BK (VBK). Al momento de efectuarse las PAS, a los laboratorios se les hizo una serie de preguntas para caracterizar sus métodos de prueba. Las respuestas a estas preguntas estaban relacionadas con la carga viral media (CVM) y la variabilidad de resultados (VR). La contribución de los factores individuales a la VR se estimó mediante análisis de la varianza (ANOVA) modelado y el uso de una selección retrospectiva de factores para ajustar los modelos. La selección del calibrador cuantitativo, “primers” y sondas preparados comercialmente, y la amplificación del gen “blanco” se encontraron como los más marcadamente asociados con cambios en CVM o VR para uno o más de los virus estudiados. Los “primers” y sondas preparadas comercialmente y los genes “blancos” de amplificación hacen la mayor contribución a la variabilidad total. Los factores que contribuyen a CVM y VR diferían entre los virus, como lo hizo la contribución relativa de cada factor a la variabilidad global. La variabilidad marcada observada en los resultados cuantitativos clínicos de la carga viral se asocian a múltiples aspectos del diseño y funcionamiento de los ensayos moleculares. La reducción de dicha variabilidad requiere un enfoque multifacético para mejorar la precisión, fiabilidad y utilidad clínica de estas pruebas importantes.

Bibliografía

En inglés

1: Hoffman NG, Cook L, Atienza EE, Limaye AP, Jerome KR. Marked variability of BK virus load measurement using quantitative real-time PCR among commonly used assays. J Clin Microbiol. 2008;46(8):2671-80.

2: Hayden RT, Hokanson KM, Pounds SB, Bankowski MJ, Belzer SW, Carr J, Diorio D, Forman MS, Joshi Y, Hillyard D, Hodinka RL, Nikiforova MN, Romain CA, Stevenson J, Valsamakis A, Balfour HH Jr; U.S. EBV Working Group. Multicenter comparison of different real-time PCR assays for quantitative detection of Epstein-Barr virus. J Clin Microbiol. 2008 Jan;46(1):157-63.

3: Di Nicola A, Ghezzi E, Gillio F, Zerilli F, Shehi E, Maritano D, Panizzo M, Bonelli F, Adlerstein D. Anchor-based fluorescent amplicon generation assays (FLAG) for real-time measurement of human cytomegalovirus, Epstein-Barr virus, and varicella-zoster virus viral loads. Clin Chem. 2008;54(11):1900-7.

4: Wolff DJ, Heaney DL, Neuwald PD, Stellrecht KA, Press RD. Multi-Site PCR-based CMV viral load assessment-assays demonstrate linearity and precision, but lack numeric standardization: a report of the association for molecular pathology. J Mol Diagn. 2009;11(2):87-92.

5: Jebbink J, Bai X, Rogers BB, Dawson DB, Scheuermann RH, Domiati-Saad R. Development of real-time PCR assays for the quantitative detection of Epstein-Barr virus and cytomegalovirus, comparison of TaqMan probes, and molecular beacons. J Mol Diagn. 2003;5(1):15-20.

En español

1: SEIMC, Orta Mira N, Guna Serrano Mdel R, Latorre Martínez JC, Ovies MR, Pérez JL, Gimeno Cardona C. Análisis de resultados del Programa Externo de Control de Calidad SEIMC de carga viral del VIH-1 y del VHC. Año 2007. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2008;26 Suppl 13:8-13.

2: Orta Mira N, Serrano Mdel R, Martínez JC, Ovies MR, Poveda M, de Gopegui ER,Cardona CG. Análisis de resultados del Programa de Control de Calidad Externo SEIMC de carga viral del VIH-1, del VHC y del VHB. Año 2010. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2011 Dec;29 Suppl 5:8-14.

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