ABCL

¿Qué saber?
Modelo de laboratorio para cultivo celular
El Comité de Redacción de Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana ha seleccionado este Capítulo de ¨Cultivos Celulares. Qué saber y cómo hacer. Celia E. Coto y Nélida A. Candurra¨ Supl. marzo de 2006 de ABCL; pp. 13-15, para su difusión a través de FABA Informa.

Por Celia E. Coto

CAPÍTULO 1
Contenido - Introducción - Unidad de trabajo y áreas de servicios

Introducción

El funcionamiento exitoso de un laboratorio de cultivo depende de varios factores: diseño y ubicación, equipamiento adecuado, experiencia y sentido común del personal encargado y entrenamiento del personal. La suma de estos factores apunta a lograr la máxima seguridad para las personas y condiciones apropiadas para los cultivos. La información que se brinda en este capítulo está focalizada en el diseño de un laboratorio de cultivo celular a escala de laboratorio, no de producción.
En primer lugar es primordial controlar a los elementos contaminantes, en ambos sentidos, es decir, proteger al trabajador de posibles agentes patógenos aportados por el cultivo celular y a éste de contaminaciones indeseables, ya sea del propio operador o del medio ambiente.
En el libro ¨Cultivos Celulares. Qué saber y cómo hacer¨ se presentan los requerimientos apropiados para el montaje de un laboratorio de cultivo celular en condiciones óptimas, es decir en circunstancias en que el grupo de trabajo posea fondos para invertir en su diseño, construcción y compra de equipos. Estos requerimientos no deben desalentar a aquellos grupos que funcionan en lugares con ingresos más limitados, ya que con un equipamiento más modesto, también se puede llevar adelante el mismo objetivo: producir células. Para ello, es necesario armonizar los locales y elementos de que se dispone en forma práctica, manteniendo sobre todo el orden y la limpieza, con la ayuda de una buena técnica de manejo en esterilidad.
Dos modelos de distribución de laboratorios con distinta cantidad de personal se presentan en la figura 1.1 y 1.2

• Figura 1.1: Laboratorio de cultivos celulares para uso de 2 ó 3 personas, con las áreas mínimas incluidas.

Unidad de trabajo y áreas de servicios

Se considera muy conveniente que él o los ambientes destinados al laboratorio de cultivos celulares estén provistos de aire filtrado. Deben ser, además, de fácil limpieza, sin molduras ni otros elementos que puedan acumular polvo. Las estufas, cajoneras, estanterías, etc., deben estar adosadas al piso o poseer una luz suficiente como para facilitar la limpieza. Los pisos deben ser preferentemente vinílicos, lavables, con drenaje de agua central. Las puertas deben ser lo suficientemente amplias como para permitir el paso de los equipos necesarios.
Existen seis funciones principales que deben ser consideradas para el buen funcionamiento de un laboratorio de cultivos celulares:

1. El área estéril o área de cultivo, que debe estar restringida sólo al cultivo celular y debe ubicarse en un lugar aislado, separado del laboratorio de microbiología u otros y del bioterio. Si se cuenta con un único ambiente para cubrir la totalidad de las funciones descriptas, esta área debe estar ubicada en una zona donde no circulen usuarios ni haya corrientes de aire. Deben colocarse en ella las cámaras de flujo laminar o en su defecto, pequeñas cabinas cerradas, de madera o metal, provistas de luz ultravioleta.

2. La incubación de los cultivos se lleva a cabo en estufas a la temperatura requerida, generalmente 37 ºC para células de vertebrados. Las estufas deben ubicarse en una zona con poco tránsito, cercana al área de cultivo propiamente dicha. Si fueren necesarias más de dos estufas, puede reemplazarse por un cuarto acondicionado y controlado termostáticamente, cuyo costo de construcción no es excesivo. Por otra parte, el costo para equipar un cuarto de incubación pequeño es similar al de equipar uno mayor, por lo que esto se tiene que tener en cuenta en el momento de decidir su instalación. Se calcula que se necesitan aproximadamente 0,2 m3 de espacio de incubación por persona.

3. La preparación de medios de cultivo puede evitarse en un laboratorio con poco personal, y en el que se procesa un número limitado de cultivos, donde quizás sea más ventajoso comprar los medios listos para usar. Sin embargo, para un laboratorio grande, es mucho más económico preparar sus propios medios. Esta área debe ser estéril y si fuera posible, contar con una cámara de flujo laminar para la filtración y envasamiento de las soluciones estériles. Se necesitan, además un medidor de pH y varios agitadores magnéticos. El personal debería usar barbijo, guardapolvo y guantes para evitar contaminaciones.

4. El área de almacenaje debe estar situada entre la zona de preparación y la zona de cultivo y debe ser de fácil acceso. Se necesitan aproximadamente 0,2 m3 a 4 ºC y 0,1 m3 a 0 ºC por persona.

5 y 6. El lavado del material y su esterilización deben llevarse a cabo en un área alejada de la zona de trabajo con los cultivos. Si necesariamente ambas zonas debieran estar en un mismo ámbito, estas dos funciones se realizan en la zona más alejada posible del área estéril, ya que el calor y la humedad que se producen son difíciles de disipar. Autoclaves y destiladores de agua deberían estar separados del resto. El lavado debe realizarse en piletas de profundidad adecuada. Debe contarse con hornos para el secado del material de vidrio y del material que sale húmedo del autoclave. Asimismo, deben existir mesadas para la preparación de los elementos a ser esterilizados.
Para un laboratorio de investigación ubicado en ámbito universitario el diseño de la figura 1.2 es el más apropiado. El listado de los equipos y elementos necesarios para la preparación de los cultivos se detallan en el capítulo 2 del libro.

• Figura 1.2: Laboratorio de cultivos celulares con áreas adyacentes de lavado y esterilización para 20 o 30 personas.

BIBLIOGRAFIA
- Bird BA, Forrester FT. Basic Laboratory Techniques in cell culture. Atlanta (GA): Departament of Health and Human Services; 1981
- Freshney RI. Culture of animal cells. 2nd ed. New York: Wiley-Liss; 1991.
- Spier RE, Griffiths JB. Animal Cell Biotechnology. Vol 1. London: Academic Press; 1985.