ABCL

Un estudio hecho en Buenos Aires según parámetros de OMS 2010
Verificación de los valores de referencia del estudio del semen
Se podrá acceder al artículo completo Diagnóstico de laboratorio de anticuerpos antifosfolípidos/2016 publicado en Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana desde www.scielo.org.ar ingresando al volumen 50, número 2, de 2016

Susana M. Curi, Patricia H.Chenlo, Mercedes N. Pugliese, Julia I. Ariagno, Herberto E.Repetto, José Vázquez, Melba S. Segovia, Gabriela R. Mendeluk.
Laboratorio de Fertilidad Masculina, Departamento de Bioquímica Clínica. Facultad de Farmacia y Bioquímica Universidad de Buenos Aires.

La infertilidad afecta aproximadamente al 15% de las parejas en edad reproductiva. El factor masculino como única causa de infertilidad es responsable del 20% de dichas parejas. La evaluación de la infertilidad permitirá identificar las condiciones para la etiología y administrar el tratamiento apropiado, si resultara factible para corregir la patología y tratar de lograr un embarazo por concepción natural. En caso contrario crear las condiciones más apropiadas para emplear el semen para técnicas de fertilización asistida.
El análisis del semen constituye la primera evaluación, sin embargo su valor predictivo para la fertilidad masculina es un tema de permanente debate posiblemente por su multifactorial etiología y por la falta de consenso respecto de los parámetros seminales que establezcan la potencial fertilidad masculina.
La Organización Mundial de la Salud (OMS) en el año 2010 publicó un manual que establecía los procedimientos para la estimación de los valores de referencia, subrayando que las observaciones recogidas representaban una población homogénea evitando las diferencias demográficas que pudieran afectar los parámetros evaluados. En esa edición estableció los valores de referencia basados en estudios previos obtenidos en 1953 hombres, habitantes de 8 países que habían sido padres en los últimos 12 meses.
El estudio computarizado para el análisis del movimiento espermático, Computarized Sperm Motion Analysis (CASA) permite identificar y evaluar en forma objetiva el número total de células móviles y analizar la trayectoria de las mismas. Diversos investigadores han publicado sus experiencias, sin embargo no hay estudios en la literatura que estimen valores de referencia.
La OMS incluye un capítulo de procedimientos de investigación que incorpora métodos de enriquecimiento y la prueba de fosforilación en tirosina de espermatozoides incubados en condiciones capacitantes. El ADN compactado es transcripcionalmente inactivo y, en consecuencia, incapaz de sintetizar proteínas. Durante la fertilización la función espermática está regulada por la fosforilación de proteínas. Este fenómeno está asociado con la capacitación, la motilidad hiperactiva, la unión a la zona pelúcida, la reacción acrosomal y la fusión con el ovocito.
Los objetivos del presente estudio consistieron en transferir los valores de la OMS verificados a hombres sanos con paternidad en el último año, en un intento de estandarizar esos parámetros en la población de Buenos Aires. Se reportaron los rangos de valores de espermatozoides totales móviles progresivos con morfología normal. Además, el estudio incluyó los parámetros cinéticos y pruebas funcionales.

Materiales y métodos

El estudio realizado aprobado por el Comité de Ética del Hospital de Clínicas José de San Martín incluyó a 39 hombres entre 21 a 41 años con fertilidad probada en el último año, sin patología aguda o crónica.
Las muestras se procesaron acorde con los criterios de la OMS 2010. El proceso de verificación de los valores de referencia se llevó a cabo de acuerdo con la guía C28A2 del Clinical Laboratory Standard Institute y la cinética espermática por el sistema CASA.
Se evaluaron las diferentes velocidades tales como la velocidad curvilínea (VCL), velocidad rectilínea (VSL), velocidad promedio (VAP) y el desplazamiento lateral de la cabeza (ALH). Además, los porcentajes de linealidad (LIN) y rectitud (STR).
La hiperactividad y la fosforilación de proteínas en espermatozoides recuperados del sobrenadante, incubándolos en condiciones capacitantes fueron evaluadas después de 1, 5 y 18 h de la incubación.
La sobrevida se determinó con el sistema CASA expresada como el % de espermatozoides móviles a las 18 h de incubación en condiciones capacitantes. Los criterios para la detección de espermatozoides hiperactivos fueron: VCL>35 µ/s; ALH>2,5 µ y STR >85%, criterios establecidos por el fabricante y avalados por diversos autores.

Métodos estadísticos:

La verificación de los datos de la OMS se realizó por la prueba de Dixon-Reed, test que permite identificar o rechazar valores extremos. Se calculó la mediana y el rango para cada parámetro. Los estudios de correlación y la diferencia entre grupos por Spearman/Anova y Frieman, respectivamente. Se consideró en todos los casos un valor significativo α>0,05.

El estudio se realizó en 23 hombres entre 20-41 años de edad, todos argentinos y residentes en Buenos Aires. El rango de peso, altura y BMI fueron de 60-109 kg, 1,68-1,85 m y 23-36,4, respectivamente. Tenían entre 1 y 4 hijos y al momento del estudio los mismos tenían de 1-12 meses de nacidos. La frecuencia sexual fue de 1-7 veces por semana y el volumen testicular de 14-30 mL, con una mediana de 22,5 mL. Los hábitos y costumbres mostraron la siguiente prevalencia: consumo de alcohol, tabaco, marihuana y drogas terapéuticas, 65, 55, 20 y 25% respectivamente. Entrenamiento físico 60%. Uso de celular o notebook cerca de los testículos 30 y 10%, respectivamente. Estas características, en general, son acordes a la idiosincrasia de los habitantes de Buenos Aires.

Resultados:

En cuanto a los parámetros seminales evaluados respecto al límite inferior de referencia de la OMS, en 3 casos de los individuos sanos tenían un volumen inferior al definido por la OMS (1,4-1,7 mL); en 2 individuos normales se obtuvieron valores disminuidos de los siguientes parámetros evaluados: concentración espermática/mL y total respecto a la OMS (12-16 x 106 y 33-46 x 106 , respectivamente; en la movilidad progresiva % y vitalidad %; valores por debajo de la referencia de 31-34% y 55-63%, en cada caso. En un caso los valores de los espermatozoides móviles y de la morfología tuvieron resultados menores a OMS; 38-42% y 3-4%, respectivamente; en todos los casos el pH estuvo dentro de los rangos de referencia, limite de referencia 7.2.
La OMS propone que la movilidad progresiva y la morfología deberían expresarse en valores absolutos. En este estudio demuestran respecto a la OMS (valores entre paréntesis) que la mediana de los espermatozoides progresivos totales, los viables totales y los normales totales, se encontraron dentro del rango de la OMS (7,7-460 x 106; 22,19-453 x 106 y 1,9-126,7 x 106, respectivamente).
El estudio de los parámetros cinéticos por CASA demostró que VCL y VSL estaban dentro del rango normal, se obtuvieron valores disminuidos de VAP, en 1 caso, en 7 casos en LIN, y SRT y en 5 casos en ALH.
En cuanto a las pruebas funcionales, sobrenado, fosforilación en tirosina e hiperactivación evaluados por movilidad progresiva en espermatozoides post sobrenado; % de recuperación; sobrevida a las 18 h; proteínas fosforiladas en tirosina a 1, 5 y 18 h; y la movilidad hiperactiva en esos mismos tiempos, en todos estos parámetros la mediana obtenida en este estudio en todos los casos se encontró dentro del rango de referencia de la OMS. En el estudio estadístico no se halló correlación en las pruebas funcionales en el % de espermatozoides hiperactivos como de células fosforiladas en tirosina. Se obtuvieron diferencias significativas en los diferentes tiempos estudiados, para el % de espermatozoides hiperactivos su valor máximo se obtuvo a las 5 h de incubación y disminuyó a las 18 h; las células fosforiladas en tirosina aumentaron en los tiempos estudiados en forma progresiva a la h, 6%; a las 5 h 26% y a las 18 h 88%.

Discusión y conclusiones:

Los valores de referencia de la OMS 2010 fueron elaborados a partir de resultados de numerosos estudios transversales en hombres normales. Además, se sugiere utilizar como referencia el límite inferior y se argumenta que valores demasiados elevados carecen de significación clínica
La OMS propone un sistema sencillo de clasificación de la movilidad de los espermatozoides que los diferencia en espermatozoides con motilidad progresiva o no, de los inmóviles. Los autores si bien están de acuerdo que la propuesta mejora la precisión pudieran ir en detrimento del valor clínico. Sugieren que la evaluación cuantitativa por el sistema CASA caracteriza de manera objetiva el movimiento espermático, aportando un dato de valor clínico.
Se propone que cada usuario estandarice y valide su propio instrumento y participe de un programa de evaluación de calidad externo que determine la variabilidad entre laboratorios.
En procedimientos de fertilización de baja complejidad se considera que 5 millones de espermatozoides móviles es el umbral requerido para realizar el procedimiento. En este estudio se obtuvo una recuperación superior a este valor límite del 41% con una mediana de 19,4 x 106 espermatozoides /mL.
Los resultados de fosforilación de proteínas en tirosina no mostraron una correlación con la sobrevida espermática en los tiempos de incubación, indicando que ambos procesos pueden estar relacionados pero podrían estar regulados por mecanismos diferentes.
La idea de este estudio fue determinar que los resultados de referencia de la OMS se verificaran en la población de Buenos Aires. Los resultados obtenidos confirman esta hipótesis excepto para el volumen espermático atribuyendo esta discrepancia a la incomodidad de obtener las muestras en el laboratorio, que pudiera reflejar un defecto en la estimulación.
La progresión futura de este estudio estará orientada a obtener los rangos de valores de referencia para los distintos parámetros.

Se podrá acceder al artículo completo Verificación de los valores de referencia del estudio del semen según OMS 2010 en Buenos Aires publicado en Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana desde www.scielo.org.ar ingresando al volumen 48, Nº 4 de 2014.