"Técnicas electroforéticas: Fundamentos y Aplicaciones
Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas, UNL

Modalidad: Teórico-Práctico
Lugar de realización: Laboratorio de Investigaciones Fisiológicas Experimentales.
Fecha de inicio: 07 de octubre de 2005 - Fecha de finalización: 21 de octubre de 2005
Dirigido a Graduados: en Bioquímica, Química, Biología, Medicina, Biotecnología y Veterinaria Dictado por docentes-investigadores del Departamento de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de la Universidad de Buenos Aires: Dra. Alcira Nesse, Dra. Graciela Garbossa, Dra. Claudia Pérez Leirós, Dra. Gladys Pérez, Dra. Daniela Vittori, Lic. Nicolás Pregi.
Coordinador: Dr. Daniel Orihuela
Objetivos: Profundizar los fundamentos y adquirir destreza en la aplicación de métodos electroforéticos para separación y caracterización de proteínas de interés en el labotarorio clínico y de investigación básica.

PROGRAMA ANALÍTICO

MÓDULO I Teórico: Electroforesis: generalidades. Características fisicoquímicas de la electroforesis. Factores que influyen en electroforesis: eléctricos, físicos, químicos. Medios soporte. Electroforesis en sistemas de pH homogéneo. Isoelectroenfoque (IEF): Teoría general. Principios fisicoquímicos. Medios soporte: gel de acrilamida y de agarosa. Anfolitos. Formación y determinación del gradiente de pH. Gradientes naturales e inmovilizados. Equipos. Fuentes de poder. Sistemas de refrigeración. Curvas de titulación de proteínas. Práctico: Condiciones eléctricas para la electroforesis. Medición de voltaje e intensidad. Electroforesis en acetato de celulosa y gel de agarosa. Tinciones generales y diferenciales. Aplicación: proteinogramas séricos y urinarios. Fechas: Viernes 7 de octubre de 18 a 21 hs. y Sábado 8 de octubre de 9 a 18 hs.MÓDULO II Teórico: Electroforesis en gel de poliacrilamida. Características de la polimerización. Catalizadores. Tamaño de poro. Teorías acerca del movimiento de las moléculas durante la electroforesis en gel de poliacrilamida. Electroforesis en disco y en placa, en condiciones nativas y desnaturalizantes. Electroforesis preparativa. Gradientes de poliacrilamida. Sistemas homogéneos y de buffers discontinuos. Determinación de pesos moleculares: diagrama de Ferguson y electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS (SDS-PAGE). Técnicas de detección. Western blot: electrotransferencia y reacción inmunológica. Técnicas bidimensionales: combinaciones de PAGE e IEF. Práctico: Electroforesis en gel de poliacrilamida. Sistemas de buffers homogéneo y discontinuo. Condiciones nativas y desnaturalizantes. Tratamiento de la muestra. Siembra. Tinciones. Secado de gel. Determinación de masas moleculares de proteínas. Transferencia a membrana de nitrocelulosa. Detección inmunológica. Revelado por reacción enzimática (fosfatasa alcalina o peroxidasa) y visualización colorimétrica. Fechas: Viernes 14 de octubre de 18 a 21 hs. y Sábado 15 de octubre de 9 a 18 hs. MÓDULO III Teórico: Electroforesis y detección inmunológica. Combinación simultánea de desarrollo electroforético y reacción inmunológica. Fundamento y descripción de técnicas. Inmunofijación, inmunoelectroforesis, electroinmuno-difusión cruzada, contrainmunoelectroforesis, electroinmunodifusión ("rocket"). Electroforesis en gel de agarosa. Condiciones. Equipos. Factores que afectan la movilidad. Aplicaciones: control de integridad de ADN, análisis de fragmentos de cDNA obtenidos por PCR, aplicación a procesos de apoptosis (ladder). Electroforesis capilar: caracterísiticas, equipos. Fundamentos de las distintas modalidades: electroforesis capilar de zona (ZCE), isoelectroenfoque (CIEF), en geles (CGE), cromatografía micelar electrocinética (MEKC). Fecha: Viernes 21 de octubre de 18 a 21 hs.

Inscripciones: En Secretaría de Extensión de la FBCB - Ciudad Universitaria - Pje. El Pozo - CP 3000 - Santa Fe -
Teléfono nº 0342 4575209 - interno 223 o al correo electrónico sextfbcb@fbcb.unl.edu.ar